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豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體ELISA檢測試劑盒

發布時間:2014-01-06 15:19:20

包裝規格:480樣/KIT;192樣/KIT

一、產品介紹:

    豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體ELISA檢測試劑盒用重組PRRSV的N蛋白包被,用來檢測血清中N蛋白抗體。在豬群監測中,可為預防和控製該疾病提供有效的信息。

二、實驗原理:

豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體ELISA檢測試劑盒是通過間接ELISA檢測血清中PRRSV抗體,用重組N蛋白包被,酶標抗體為豬抗IgG。操作步驟為樣品稀釋,加樣,孵育,洗滌;再加入酶標抗體,如果血清中含有N蛋白抗體,則抗體會與酶標板上包被的重組N蛋白結合,酶標抗體也會與血清中N蛋白抗體結合,加入底物後,顏色將會變深。如果血清中沒有N蛋白抗體,顏色變化會很小,或不發生變化。

三、試劑盒內容:

四、采樣標準:

1、盡可能采集新鮮血清樣品;

2、采集全血,分離出血清後,將血清存放在-20 ℃冰箱,以備使用;

3、不要使用溶血或汙染嚴重的樣品;

4、大中型豬場監測中,每群(後備母豬、經產母豬、斷奶仔豬等)采樣不少於35頭份。

五、注意事項:

1、使用之前請仔細閱讀操作說明;

2、試劑盒存儲條件:4-8 ℃。

六、實驗前準備:

1、稀釋10倍洗液:如20 mL洗液,加入180 mL去離子水混勻,備用;

2、TMB底物顯色液:使用前請恢複到室溫,低溫可能導致不顯色。

七、樣品稀釋:

1、準備好1 mL樣品稀釋板或微量試管;

2、100倍稀釋樣品:分步稀釋,先加入90 μL樣品稀釋液,再加入10 μL的樣品血清,混合均勻;再取90 μL樣品稀釋液,加入10 μL經過第一步稀釋的血清,混合均勻即可。(陽性對照血清和陰性對照血清不要稀釋)

八、操作步驟:

1、實驗前準備及加樣

a使用前所有試劑盒組份都必須恢複到室溫,試劑應輕輕旋轉或振蕩均勻;

b取出包被板,標記好樣品和陰、陽性對照的位置;(陰陽性對照各做兩孔)

c每孔分別加入100 μL陽性、陰性對照和稀釋後的樣品,貼上封板膜,22-27 ℃孵育30 min。

2、洗板及加試劑

a小心揭去封板膜,棄去各孔中液體,拍淨。每孔加滿洗液300 μL,洗3次。最後在吸水紙上拍淨;

b每孔加入酶標抗體100 μL,置22-27 ℃孵育30 min;

c重複a,洗5-6次;

d每孔加入TMB底物顯色液100 μL,22-27 ℃避光孵育15 min。

3、讀數

每孔加入終止液50 μL,置酶標儀450 nm波長處測定各OD450值。

九、結果判定

1、實驗結果同時符合下列條件,方為有效:

陽性值≥0.5               陰性值≤0.3

2、判定標準:

S/P值的計算方程式:

S/P=【樣品值-陰性值】/【陽性值-陰性值】

S/P值≥0.4   判為陽性;

S/P值<0.3   判為陰性;

0.3≤S/P值<0.4   可疑。

注:1 檢測結果不能區分感染陽性還是免疫陽性;

2 如果檢測結果為可疑,請一個月後進行再次檢測;

3 如果有陽性結果異常的血清樣品,計算該樣品S/P平均值,有助於提供更多血清學分析信息。


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