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豬瘟病毒(CSFV)抗體ELISA檢測試劑盒操作說明書

發布時間:2014-01-23 11:29:42

    一、產品類型:阻斷ELISA試劑盒,檢測豬瘟病毒抗體。
    二、產品介紹:
    豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒是建立在多重誘捕阻斷ELISA技術上,使用了CSFV的E2蛋白和單克隆抗體。用於檢測和評估豬群免疫後CSFV中和抗體水平。
    三、實驗原理:
    豬瘟病毒抗體阻斷ELISA是將經過免疫親和技術純化的重組E2糖蛋白包被在酶標板上,如果樣品中存在抗E2糖蛋白的抗體,那麽在加入辣根過氧化物酶結合的抗E2糖蛋白單克隆抗體以及顯色底物後,顏色將不會加深。顏色的OD值和血清樣品中抗E2糖蛋白特異性抗體的量呈負相關。樣品的OD值同陽性對照以及陰性對照比較後得到血清樣品中抗體的百分比值。
    四、特點:
    豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒是用來檢測豬血清中抗E2糖蛋白的抗體,是一種快速、簡單和特異的方法,可以排除其他瘟病毒抗體比如牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)抗體的交叉反應。該方法同中和酶聯分析法(NPLA)有非常好的相關性,同NPLA比較,敏感度97.7 % ,特異性99.2 %。
    五、試劑盒組成:
    名稱                    數量
    1、包被板                  Coated Plate 2塊
    2、10倍洗液               10×Washing Buffer 100毫升
    3、樣品稀釋液              Dilution Buffer 60毫升
    4、酶標抗體                HRP-Antibodies 40毫升
    5、陽性對照血清            Positive Control  1.0毫升
    6、陰性對照血清            Negative Control 1.0毫升
    7、TMB底物顯色液         TMB Substrate 30毫升
    8、終止液                  Stop Solution 20毫升
    9、試劑盒操作說明書        Instruction Manual 1份   
    六、操作步驟:
    1、實驗準備
    a 使用前所有試劑盒組份都必須恢複到室溫,試劑應輕輕旋轉或振蕩均勻;
    b 稀釋【10倍洗液】:如20mL洗液,加入180mL去離子水混勻,備用;
    c 取出【包被板】,在記錄表上記錄陰、陽性對照品和樣品的加樣位置。
    2、加樣
    a 【包被板】每孔加入50 μL【樣品稀釋液】;
    b 加入【陽性對照血清】、【陰性對照血清】和待檢血清各50 μL。其中【陽性對照血清】、【陰性對照血清】各加2孔,每份待檢血清加1孔;
    c 貼上封板膜,22-27 ℃孵育1小時或2-4℃過夜。
    3、加【酶標抗體】
    a 小心揭掉封板膜,棄去各孔中液體,拍淨。每孔加洗液300 μL,洗3次,最後在吸水紙上拍淨;
    b 每孔加入【酶標抗體】100 μL,22-27 ℃孵育30分鍾。
    4、加【TMB底物顯色液】
    a 棄去各孔中液體,拍淨。每孔加洗液300 μL,洗3次,最後在吸水紙上拍淨;
    b 每孔加入【TMB底物顯色液】100 μL,22-27 ℃避光孵育15分鍾。
    5、終止反應和讀數
    每孔加入【終止液】50 μL,輕振混勻,置酶標儀450 nm波長處測定各孔OD450nm值。
    七、結果判定:
    1、實驗結果同時符合下列條件,方為有效:
    【陰性對照血清】OD450nm平均值>0.5
    【陽性對照血清】OD450nm平均值<0.2
    2、計算方法
    計算待檢樣品CSFV抗體阻斷率:
    樣品阻斷率(%PC)=【陰性對照血清】OD450nm平均值-樣品OD450nm值 ×100%
       【陰性對照血清】OD450nm平均值-【陽性對照血清】OD450nm平均值 
    3、判定標準
    a 樣品%PC<40%,判為陰性;
    樣品%PC≥40%,判為陽性;
    b 如果結果可疑,檢查樣品有無汙染或重檢;
    c 如果重檢結果依然可疑,應結合豬場流行病學情況,重新采樣並檢測。

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