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口蹄疫病毒O型(FMDV-O)抗體

發布時間:2014-01-23 11:40:16

    一、介紹:
    口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起急性、熱性高度接觸性傳染病,主要侵害偶蹄獸,一旦發生病,將會引起嚴重的經濟損失。口蹄疫病毒屬於微核糖核酸病毒科口蹄疫毒屬,目前已知共有7種血清型,即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亞洲I型。口蹄疫病毒(FMDV)感染免疫後,產生抗體的主要中和表麵在VP1蛋白的siteA(141-160),國際獸醫局(OIE)規定的血清學檢測方法是病毒中和試驗和阻斷ELISA,ELISA檢測方法能夠檢測特定血清型抗體,不僅敏感性和符合性非常好,而且檢測速度快,穩定好。FMDV-O型抗體ELISA檢測試劑盒是通過阻斷ELISA,檢測O型中和抗體,用重組FMDV rP13C蛋白包被,抗VP1蛋白A位點單抗為酶標抗體。在免疫區能夠用來做抗體監測和免疫效果評估。適用對象包括豬、牛、山羊以及綿羊等。
    二、試劑盒組成:
    名稱                                      數量
    1、包被板 Coated Wells                    2塊
    2、10倍洗液 10× Washing Buffer           100毫升
    3、樣品稀釋液 Dilution Buffer             60毫升
    4、酶標抗體 HRP  Antibodies (Type O)      40毫升
    5、陽性血清對照 Positive Control          1.0毫升
    6、陰性血清對照 Negative Control          1.0毫升
    7、TMB底物顯色液 TMB substrate            30毫升
    8、終止液 Stop Solution                   20毫升
    9、試劑盒操作說明書 Instruction Manual    1份
    三、注意事項:
    1、使用之前請仔細閱讀操作說明書;
    2、試劑盒存儲條件:2-8 ℃;
    四、實驗前準備:
    1、稀釋10倍洗液:如20 ml洗液,加入180 ml去離子水混勻,備用。
    2、TMB底物顯色液:使用前請恢複到室溫,低溫可能導致不顯色。
    五、操作步驟:
    1、使用前將試劑盒所有組件恢複到室溫,取出包被板;
    2、標記好樣品、陽性對照和陰性對照(對照各做兩個孔),每個孔加入樣品稀釋液80ul,然後加入樣品血清、陽性對照、陰性
對照各20ul;
    3、室溫孵育60分鍾;
    4、洗板:每孔加入洗滌液300 ul,洗滌3次,最後在吸水紙上拍幹;
    5、每孔加入100 ul酶標抗體,室溫孵育60分鍾;
    6、重複步驟4,洗滌3次;
    7、每孔加入TMB底物顯色液100 ul,室溫避光孵育15分鍾;
    六、讀數:
    每孔加入50 ul終止液,在酶標儀450 nm波長處讀數。
    七、結果判定:
    1、實驗有效性判定:
    陰性對照OD值≥0.60      
    陽性對照OD值≤0.30
    2、判定標準:
    S/N值的計算方程式: S/N=【樣品值/陰性值】
    S/N值≤0.60   判為陽性;   
    S/N值>0.60   判為陰性;
    注:如果檢測結果可疑,對樣品進行再次檢測。

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